SUMMARY
AbstractPositive control of Plasmodium spp. is needed in identification of malaria species using Polymerase Chain Reaction (PCR) method. The limitedness of malaria positive control encourages us to develop the cloning method to multiply Plasmodiumspp.DNA particularly P.vivax, P. malariae, and P. ovale that are still unable to be cultured continuously. DNA product of single round and nested PCR were used as DNA target for cloning method. The cloning method consisted of several processes which are ligation of DNA target into TOPO vector, transformation into competent Escherichia coliDH5a, and selection of transformation product using selective media. In the end of the process, PCR was done to check the success rate of cloning method. Single round PCR resulting 200-300 bp of DNA product, while nested PCR resulting 100-200 bp of DNA product. The advantages of cloning method are produce large amount of products in such a shorter time in process with just small amounts of sample required. However, compared to continuous culture and blood specimen, DNA producted by cloning process can only be used for a spesific PCR method. Furthermore, other test is still required to examine stability of cloning product.Keywords: Plasmodium spp., cloning, single round PCR, nested PCR.ABSTRAKKeterbatasan kontrol positif untuk pemeriksaan spesies malaria secara molekuler dengan teknik Polymerase Chain Reaction(PCR), mendorong kita mencari cara alternatif dengan metode kloning. Metode kloning dilakukan untuk perbanyakan DNA Plasmodiumspp. terutama spesies yang belum dapat dikembangbiakkan secara kultur berkesinambungan. Amplifikasi DNA Plasmodium spp. menggunakan metode single rounddan nestedPCR yang selanjutnya produk PCR tersebut digunakan sebagai DNA target dalam proses kloning. Proses kloning meliputi ligasi ke dalam TOPO vektor, transformasi ke dalam host Escherichia coliDH5a kompeten, dan seleksi hasil transformasi pada media selektif. Selanjutnya dilakukan lagi PCR spesiasi sebagai tahap akhir untuk mengecek keberhasilan kloning. Metode single roundPCR menghasilkan produk DNA dengan ukuran panjang basa 200-300 bp, sedangkan metode nestedPCR menghasilkan produk DNA berukuran 100-200 bp. Keuntungan metode kloning adalah dapat menghasilkan produk DNA dengan jumlah banyak dari volume sampel yang sedikit dan waktu yang relatif singkat. Jika dibandingkan dengan DNA parasit dari hasil kultur berkesinambungan, penggunaan DNA hasil kloning sebagai kontrol positif hanya terbatas pada satu metode PCR saja. Selain itu tes lanjutan untuk menguji stabilitas produk kloning juga sangat diperlukan.Kata kunci: Plasmodium spp., kloning, single roundPCR, nestedPCR.