SUMMARY
Glucosamine is known to be a supplement for treating osteoarthritis and joint pain. Recently, Indonesian coastal communities have developed sea cucumber enriched in glucosamine as an alternative to crustaceans, a widely consumed-glucosamine source. The aim of this study is to develop a high performance liquid chromatography tandem with diode array detector (HPLC-DAD) method for the determination of glucosamine in sea cucumber products was developed and validated. Glucosamine were extracted from dried sea cucumber samples through hydrolysis using hydrochloric acid 5 M, followed by derivatization using Fmoc-Cl (9-Fluorenylmethyl chloroformate) and borate buffer before subjected to HPLC-DAD. All preparation steps for samples and standards were performed using the gravimetric dilution method. The reversed-phase chromatographic separation was conducted in the C18 column by applying a gradient elution of water and acetonitrile. The results showed good linearity with coefficient determination at 0.999 in the range concentration of 1-220 mg/kg. The LOD and LOQ were found to be 0.16 and 0.53 mg/kg respectively, while the recoveries were in the range of 98-99%. The intraday precision values were lower than 2% for four different spiked concentrations (10, 60, 100, and 200 mg/kg). The method then successfully applied to analyze glucosamine in twenty local dried sea cucumber samples. The results showed that eleven of samples contain glucosamine in the range of 100 to 2700 mg/kg.Keywords: fmoc-cl, glucosamine, hplc-dad, sea cucumberABSTRAKGlukosamin dikenal sebagai suplemen untuk mengobati osteoartritis dan nyeri sendi. Baru-baru ini masyarakat pesisir Indonesia telah mengembangkan teripang yang diperkaya glukosamin sebagai alternatif pengganti krustasea yang merupakan sumber glukosamin yang banyak dikonsumsi. Tujuan dari penelitian ini adalah melakukan pengembangan dan validasi metode high performance liquid chromatography dengan diode array detector (HPLC-DAD) untuk penentuan glukosamin pada produk teripang. Glukosamin diekstraksi dari sampel teripang kering melalui hidrolisis menggunakan asam klorida 5 M, dilanjutkan dengan derivatisasi menggunakan larutan Fmoc-Cl (9-Fluorenylmethyl chloroformate) dan buffer borat sebelum dilakukan analisis menggunakan HPLC-DAD. Semua langkah preparasi sampel dan standar dilakukan dengan menggunakan metode pengenceran gravimetri. Pemisahan kromatografi fase terbalik dilakukan di kolom C18 dengan menerapkan elusi gradien menggunakan air dan asetonitril sebagai fasa gerak. Hasil penelitian menunjukkan linieritas yang baik dengan koefisien determinasi sebesar 0,999 pada rentang konsentrasi 1 sampai 220 mg/kg. Metode ini memiliki LOD dan LOQ masing-masing 0,16 dan 0,53 mg/kg, sedangkan nilai perolehan kembali berada di kisaran 98-99%. Nilai presisi intraday ditemukan lebih rendah dari 2% untuk empat konsentrasi spiking yang berbeda (10, 60, 100 dan 200 mg/kg). Metode ini kemudian berhasil diterapkan untuk menganalisis glukosamin pada dua puluh sampel teripang kering lokal. Hasilnya menunjukkan bahwa sebelas sampel mengandung glukosamin dalam rentang 100 hingga 2700 mg/kg.Kata kunci: fmoc-cl, glukosamin, hplc-dad, teripang